細(xì)胞株免疫熒光主要用于蛋白定位研究和細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，細(xì)胞免疫熒光技術(shù)是利用免疫技術(shù)和熒光標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合，原理就是利用抗原-抗體反應(yīng)之后，采用熒光標(biāo)記，標(biāo)記完成后，顯微鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)某種抗原成分的多少。

從而做出一個定位研究，也可以為細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)提供一個明確的指導(dǎo)，細(xì)胞免疫熒光具有敏感性強(qiáng)、特異性高、速度快的特點(diǎn)，是目前比較常用的組織學(xué)技術(shù)，也是比較準(zhǔn)確的。

一、實(shí)驗方法原理

在進(jìn)行細(xì)胞免疫熒光過程中，需要用到細(xì)胞爬片，通過將爬片浸在細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)，細(xì)胞在爬片上生長，進(jìn)而進(jìn)行細(xì)胞的免疫熒光。

二、實(shí)驗材料

1. 細(xì)胞樣品。

2. 試劑、試劑盒：多聚甲醛 70%甲醇 丙酮 PBS Triton  BSA DAPI染液 DABCO Tris 甘油。

3. 儀器、耗材：玻片。

三、細(xì)胞株爬片免疫熒光實(shí)驗步驟

1. 在培養(yǎng)板中將已爬好細(xì)胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min。

2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min， PBS浸洗玻片3次，每次3min。

3. 0.5%Triton X-100(PBS配制)室溫通透20min(細(xì)胞膜上表達(dá)的抗原省略此步驟)。

4. PBS浸洗玻片3次，每次3min，吸水紙吸干PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室溫封閉30min。

5. 吸水紙吸掉封閉液，不洗，每張玻片滴加足夠量的稀釋好的一抗并放入濕盒，4℃孵育過夜。

6. 加熒光二抗： PBST 浸洗爬片3次，每次3min，吸水紙吸干爬片上多余液體后滴加稀釋好的熒光二抗，濕盒中20-37℃孵育1h，PBST浸洗切片3次，每次3min。注意：從加熒光二抗起，后面所有操作步驟都盡量在較暗處進(jìn)行。

7. 復(fù)染核：滴加DAPI避光孵育5min，對標(biāo)本進(jìn)行染核，PBST 5minx4次洗去多余的DAPI。

8. 用吸水紙吸干爬片上的液體，用含抗熒光淬滅劑的封片液封片，然后在熒光顯微鏡下觀察采集圖像。

注意事項

1.取細(xì)胞株爬片時，動作應(yīng)輕柔，防止將細(xì)胞爬片夾碎，影響實(shí)驗進(jìn)程。

2.種細(xì)胞過程中，要注意將細(xì)胞輕柔混勻，“八"字或者“十"字形搖晃，防止細(xì)胞局部生長過密。

將在力所能及的范圍內(nèi)，竭誠為您提供支持，我們保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，細(xì)胞株為您的實(shí)驗保駕護(hù)航，保證安全快速高效放心的送至客戶的手中。

如您有技術(shù)問題，請通過發(fā)郵件的方式，將您的技術(shù)問題發(fā)給我們，非質(zhì)量問題的退換貨，請您及時與客服人員聯(lián)絡(luò)。方便產(chǎn)品名稱將及時為您解決。