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酶免疫技術(shù)是三大經(jīng)典標(biāo)記免疫技術(shù)之一,是以酶標(biāo)記抗體或抗原為主要試劑的一種標(biāo)記免疫分析技術(shù)。隨著相關(guān)新技術(shù)的不斷問世,如雜交瘤單克隆抗體技術(shù)(使各種對抗原決定簇高度特異的單克隆抗體可以在體外批量生產(chǎn))、生物素-親和素放大系統(tǒng)的應(yīng)用以及與化學(xué)發(fā)光和電化學(xué)發(fā)光技術(shù)的偶聯(lián)等,明顯地提高民分析和測定方法的特異性、靈敏度及其自動化程度,使酶免疫技術(shù)不斷更新,應(yīng)用范圍不斷拓寬。當(dāng)前,酶免疫技術(shù)已與形式各異、各具特點(diǎn)和用途的定位、定量和超微量測定的標(biāo)記免疫分析技術(shù)融合發(fā)展,在醫(yī)學(xué)和生物學(xué)中的應(yīng)用日益廣泛,是取代放射免疫技術(shù)的主要方法之一。 然而,近來許多客戶向我們反映一些唯利是圖的公司和小作坊,用假冒偽劣的ELISA試劑盒坑害廣大的科研工作者,他們往往唯利是圖,無視科學(xué)研究的嚴(yán)謹(jǐn)性和嚴(yán)肅性,讓廣大的科研工作者被動造假,嚴(yán)重?cái)_亂了科研工作,嚴(yán)重?cái)_亂了市場秩序,所以我們有義務(wù),有責(zé)任揭露這些作偽造假者制作假冒偽劣ELISA試劑盒的手法,本期為您解析利用干擾實(shí)驗(yàn)即可辨別ELISA試劑盒是否檢測目的抗原,方法如下:
(1)將針對試劑盒特異性的重組蛋白抗原和試劑盒中的檢測抗體配置成antibody: antigen≈1:2的混合孵育液
(2)37℃孵育15分鐘后,代替原試劑盒中的檢測抗體
(3)后續(xù)操作按照試劑盒說明書進(jìn)行,加檢測抗體、酶復(fù)合物和底物
(4)實(shí)驗(yàn)完畢后,檢測其標(biāo)準(zhǔn)曲線,如果標(biāo)準(zhǔn)曲線良好則說明加入的目的抗原和試劑盒抗體不匹配,試劑盒檢測抗體針對的是非目的抗原,該試劑盒為偽劣假造ELISA試劑盒。
(5)如果標(biāo)準(zhǔn)曲線無線性,則說明試劑盒檢測抗體已被目的抗原中和或干擾,影響了其實(shí)際試劑盒抗體的檢測作用,則該試劑盒檢測抗體針對的是目的抗原。